Informacja

Drogi użytkowniku, aplikacja do prawidłowego działania wymaga obsługi JavaScript. Proszę włącz obsługę JavaScript w Twojej przeglądarce.

Tytuł pozycji:

Continuous Fluorescence Monitoring of Rapid Cycle DNA Amplification

Tytuł:
Continuous Fluorescence Monitoring of Rapid Cycle DNA Amplification
Autorzy:
Carl T. Wittwer
Mark G. Herrmann
Alan A. Moss
Randy P. Rasmussen
Temat:
Biology (General)
QH301-705.5
Źródło:
BioTechniques, Vol 54, Iss 6, Pp 314-320 (2013)
Wydawca:
Future Science Ltd, 2013.
Rok publikacji:
2013
Kolekcja:
LCC:Biology (General)
Typ dokumentu:
article
Opis pliku:
electronic resource
Język:
English
ISSN:
1940-9818
0736-6205
Relacje:
https://doaj.org/toc/0736-6205; https://doaj.org/toc/1940-9818
DOI:
10.2144/000114043
Dostęp URL:
https://doaj.org/article/29c5712a57c44720aec9857606f9d9ff  Link otwiera się w nowym oknie
Numer akcesji:
edsdoj.29c5712a57c44720aec9857606f9d9ff
Czasopismo naukowe
Rapid cycle DNA amplification was continuously monitored by three different fluorescence techniques. Fluorescence was monitored by (i) the double-strand-specific dye SYBR Green I, (ii) a decrease in fluorescein quenching by rhodamine after exonuclease cleavage of a dual-labeled hydrolysis probe and (iii) resonance energy transfer of fluorescein to Cy5 by adjacent hybridization probes. Fluorescence data acquired once per cycle provides rapid absolute quantification of initial template copy number. The sensitivity of SYBR Green I detection is limited by nonspecific product formation. Use of a single exonuclease hydrolysis probe or two adjacent hybridization probes offers increasing levels of specificity. In contrast to fluorescence measurement once per cycle, continuous monitoring throughout each cycle monitors the temperature dependence of fluorescence. The cumulative, irreversible signal of hydrolysis probes can be distinguished easily from the temperature-dependent, reversible signal of hybridization probes. By using SYBR Green I, product denaturation, annealing and extension can be followed within each cycle. Substantial product-to-product annealing occurs during later amplification cycles, suggesting that product annealing is a major cause of the plateau effect. Continuous within-cycle monitoring allows rapid optimization of amplification conditions and should be particularly useful in developing new, standardized clinical assays.

Ta witryna wykorzystuje pliki cookies do przechowywania informacji na Twoim komputerze. Pliki cookies stosujemy w celu świadczenia usług na najwyższym poziomie, w tym w sposób dostosowany do indywidualnych potrzeb. Korzystanie z witryny bez zmiany ustawień dotyczących cookies oznacza, że będą one zamieszczane w Twoim komputerze. W każdym momencie możesz dokonać zmiany ustawień dotyczących cookies